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Comparative study of Mycobacterium bovis primary isolation methods BJM
Issa,Marina de Azevedo; Soares Filho,Paulo Martins; Fonseca Júnior,Antônio Augusto; Hodon,Mikael Arrais; Santos,Lílian Cristian dos; Reis,Jenner Karlisson Pimenta dos; Cerqueira Leite,Rômulo.
Abstract For the definitive diagnosis of bovine tuberculosis, isolation of the etiologic agent is required. However, there is no consensus on the best methodology for isolation of Mycobacterium bovis in Brazil. This study evaluated the most used decontaminants and culture media in the country, in order to identify the best combination for the Brazilian samples. Three decontaminants - 2% sodium hydroxide (w/v), 0.75% hexadecylpiridinium chloride (w/v) and 5% sulphuric acid (v/v) and four culture media - 7H11 Middlebrook with additives and OADC supplement “A” (7H11 A), the same media with another supplement trademark (7H11 B), tuberculosis blood agar (B83) and Stonebrink's medium were compared. Regarding the isolation, there were no significant differences...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Mycobacterium bovis; Diagnosis; Middlebrook 7H11; Isolation; Sulphuric acid.
Ano: 2017 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822017000100139
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Comparison of nine DNA extraction methods for the diagnosis of bovine tuberculosis by real time PCR Ciência Rural
Moura,André; Hodon,Mikael Arrais; Soares Filho,Paulo Martins; Issa,Marina de Azevedo; Oliveira,Ana Paula Ferreira de; Fonseca Júnior,Antônio Augusto.
ABSTRACT: Bovine tuberculosis is an infectious disease with a high impact on the cattle industry, particularly in developing countries. PCR is a very sensitive method for detection of infectious agents, but the sensitivity of molecular diagnosis is largely dependent on the efficiency of the DNA extraction methods. The objective of this study was to evaluate DNA extraction methods for direct detection of Mycobacterium bovis in bovine tissue. Nine commercial kits for DNA extraction were evaluated when combined with two real time PCRs. The DNeasy Blood & Tissue Kit from QIAGEN showed better performance and sensitivity followed by the DNA Mini Kit RBC and FTA Elute Micro Card. Results suggested that, even when the analytical sensitivity of the qPCR is...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Bovine tuberculosis; DNA extraction; Real time PCR.
Ano: 2016 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782016000701223
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Diagnóstico e genotipagem do vírus da pseudoraiva por nested-PCR e análise de restrição enzimática Ciência Rural
Fonseca Júnior,Antônio Augusto; Carmagos,Marcelo Fernandes; D'Ambros,Régia Maria Feltrin; Braga,Alexandre Carvalho; Ciacci-Zanella,Janice; Heinemann,Marcos Bryana; Leite,Rômulo Cerqueira; Reis,Jenner Karlisson Pimenta dos.
A pseudoraiva (PR) é uma enfermidade viral responsável por consideráveis perdas econômicas na indústria de suínos. O vírus da pseudoraiva (PrV) apresenta apenas um sorotipo, mas, por análise de restrição enzimática, foi classificado em quatro genótipos denominados I, II, III e IV. Os métodos usados para genotipagem dependem do isolamento do vírus, da purificação do DNA viral, da restrição enzimática do genoma completo e da visualização após eletroforese. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um método mais rápido e sensível para detectar e genotipar o PrV por nested-PCR e análise de restrição enzimática. Vinte isolados do PrV das regiões Sul e Sudeste do Brasil e a estirpe padrão Shope foram replicadas em células PK-15 e submetidas à nested-PCR para o...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Genotipagem; Nested-PCR; Pseudoraiva; Restrição enzimática.
Ano: 2010 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782010000400027
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Estudo testa eficiência de métodos de extração de DNA para diagnóstico de tuberculose bovina Ciência Rural
Fonseca Júnior,Antônio Augusto.
Tipo: Info:eu-repo/semantics/other
Ano: 2024 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782016010900002
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PCR em tempo real para diagnóstico da leucose enzoótica bovina Ciência Rural
Dias,Natanael Lamas; Fonseca Júnior,Antônio Augusto; Rodrigues,Daniel Sobreira; Camargos,Marcelo Fernandes.
O objetivo deste trabalho foi realizar a validação de uma reação em cadeia da polimerase em tempo real com o sistema Plexor® (qPCR) para o diagnóstico da Leucose Enzoótica Bovina (LEB), por meio da comparação com testes de diagnóstico recomendados pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE). A qPCR foi comparada com duas outras técnicas: a PCR nested (nPCR) e a imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Das 82 amostras analisadas pela qPCR e nPCR, 79 apresentaram resultados concordantes, sendo a concordância, classificada pelo Índice Kappa, como alta. Entre as PCRs e a IDGA, o número de resultados concordantes foi de 71 e 69, respectivamente, para qPCR e nPCR, sendo a concordância classificada como considerável. A qPCR apresentou altos valores de sensibilidade...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: BLV; Validação; QPCR; NPCR; IDGA.
Ano: 2012 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782012000800017
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Validation of a real-time PCR assay for the molecular identification of Mycobacterium tuberculosis BJM
Sales,Mariana L.; Fonseca Júnior,Antônio Augusto; Orzil,Lívia; Alencar,Andrea Padilha; Silva,Marcio Roberto; Issa,Marina Azevedo; Soares Filho,Paulo Martins; Lage,Andrey Pereira; Heinemann,Marcos Bryan.
Mycobacterium tuberculosis is the major cause of tuberculosis in humans. This bacillus gained prominence with the occurrence of HIV, presenting itself as an important opportunistic infection associated with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). The current study aimed to develop a real-time PCR using Eva Green technology for molecular identification of M. tuberculosis isolates. The primers were designed to Rv1510 gene. Ninety nine samples of M. tuberculosis and sixty samples of M. bovis were tested and no sample of the bovine bacillus was detected by the qPCR. Statistical tests showed no difference between the qPCR and biochemical tests used to identify the Mycobacterium tuberculosis. The correlation between tests was perfect with Kappa index of 1.0...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Mycobacterium tuberculosis; Diagnosis; Real time PCR.
Ano: 2014 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822014000400029
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Validation of the multiplex PCR for identification of Brucella spp. Ciência Rural
Orzil,Lívia de Lima; Preis,Ingred Sales; Almeida,Iassudara Garcia de; Souza,Patrícia Gomes de; Soares Filho,Paulo Martins; Jacinto,Fabrício Barcelos; Fonseca Júnior,Antônio Augusto.
ABSTRACT: A multiplex PCR technique for detection of Brucella spp. in samples of bacterial suspension was validated as a complementary tool in the diagnosis of the disease. This technique allows the characterization of the agent without performing biochemical tests, which greatly reduces the time for a final diagnosis, and provides more security for the analyst by reducing the time of exposure to microorganisms. The validation was performed in accordance with the Manual of Diagnostic Tests from OIE (2008) and following the requirements present in the ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005. The mPCR validated in this study identified the different species of Brucella ( Brucella abortus , B. suis , B. ovis e B. melitensis ) of bacterial suspension obtained from the...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Brucellosis; Molecular identification; Zoonosis; Brucella; Multiplex PCR.
Ano: 2016 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782016000500847
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